말라리아의 혈액도말법

 

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혈액도말법의 정의와 중요성

말라리아 진단에서 혈액도말법이란 무엇일까요? 혈액도말법은 말초 혈액을 슬라이드 글라스에 얇게 펴바른 후 특수 염색을 하여 현미경으로 관찰함으로써 말라리아 원충을 검출하는 방법입니다[1]. 이는 말라리아 진단의 가장 기본적이면서도 중요한 검사법이라 할 수 있습니다.

 

혈액도말법이 중요한 이유는 무엇일까요? 이 방법은 저렴한 비용으로 비교적 쉽게 시행할 수 있으면서도 특이도가 높아, 말라리아 확진에 매우 유용하기 때문입니다[2]. 또한 원충의 종류와 밀도를 파악할 수 있어 치료 방침 결정과 예후 판정에도 도움이 됩니다.

 

혈액도말법에 익숙해지면 어떤 점이 좋을까요? 숙련된 검사자라면 말라리아 진단의 정확도를 높일 수 있습니다. 나아가 말라리아의 유행 양상과 역학적 특성을 파악하는 데에도 크게 기여할 수 있습니다. 따라서 진단 현장에서 일하는 의료진은 혈액도말법의 중요성을 인지하고, 숙련도를 높이려 노력해야 할 것입니다.

혈액도말 표본의 제작 방법

그렇다면 혈액도말 표본은 어떻게 만들까요? 먼저 준비물을 갖추는 것이 중요합니다. 필요한 것은 깨끗한 슬라이드 글라스, 란셋, 알코올 솜, 핀셋, 도말용 막대 등입니다[3].

 

우선 환자의 손가락 끝을 알코올 솜으로 닦은 후 란셋으로 찔러 혈액을 한 방울 채취합니다. 이때 너무 세게 짜내면 조직액이 섞여 검사에 방해가 될 수 있으므로 주의해야 합니다. 채취한 혈액을 슬라이드 끝에 놓고, 다른 슬라이드의 모서리를 30-45도 각도로 대어 앞으로 밀면서 얇고 균일하게 펴 바릅니다. 이때 너무 두껍거나 얇지 않도록 힘 조절에 신경 써야 합니다[4].

 

혈액도말 시 주의할 점은 무엇일까요? 우선 슬라이드는 깨끗하고 기름기가 없어야 합니다. 혈액이 슬라이드에 잘 퍼지지 않으면 다시 시행해야 합니다. 도말 속도가 너무 빠르면 모양이 일그러지고, 느리면 두꺼워지므로 적당한 속도를 유지하는 것이 중요합니다. 도말 후 빨리 건조시켜야 적혈구가 변형되지 않습니다.

혈액도말 표본의 염색과 판독

혈액도말 표본을 제작한 후에는 어떻게 할까요? 건조된 도말 표본을 염색하는 과정이 필요합니다. 가장 흔히 사용되는 염색법은 Giemsa 염색입니다[5]. 이는 말라리아 원충의 세포질을 푸르게, 핵을 적색으로 염색하여 잘 구분되도록 해줍니다.

 

먼저 메탄올로 고정한 후, Giemsa 원액을 완충액으로 적당히 희석하여 30분-45분 정도 염색합니다. 증류수로 충분히 세척한 다음 건조시키면 염색이 완료됩니다. 판독 시에는 현미경의 배율을 높여가며 전체를 꼼꼼히 살펴보아야 합니다[6]. 통상 100배에서 전체적인 분포와 적혈구 밀도를 파악한 후, 400-1,000배에서 정밀하게 원충을 관찰하고 동정합니다.

 

말라리아 혈액도말 판독, 어떤 점이 중요할까요? 충분한 시야를 관찰해야 위음성을 피할 수 있습니다. 일반적으로 최소 100시야 이상을 보는 것이 권장됩니다. 또한 원충의 종에 따른 특징적 소견을 잘 숙지하고, 감별진단에 유의해야 합니다. 경험이 부족할 때는 도감이나 아틀라스를 참고하는 것도 도움이 될 수 있습니다.

 

혈액도말법, 제대로 익히려면 어떻게 해야 할까요? 무엇보다 반복 숙달이 필요합니다. 실제 검체를 자주 접하고, 정확한 피드백을 받는 것이 중요합니다. 숙련자의 지도 아래 체계적으로 배우는 것도 좋은 방법입니다. 또한 도서나 온라인 자료를 활용한 자기 학습으로 이론적 지식을 보완하는 것도 필요할 것입니다[7].

혈액도말법의 장단점과 한계

혈액도말법의 장점은 무엇일까요? 앞서 언급했듯이 비용이 저렴하고, 특수한 장비 없이도 시행할 수 있어 접근성이 높습니다. 또한 원충의 종과 밀도에 대한 정보를 제공하여 말라리아 진단에 매우 유용합니다. 숙련된 검사자에 의해 시행될 경우 민감도와 특이도가 각각 95%, 98% 이상으로 보고되고 있습니다[8].

 

반면 혈액도말법의 단점도 있습니다. 무엇보다 검사자의 숙련도에 크게 의존한다는 점입니다. 미숙한 검사자가 시행할 경우 위음성이나 위양성의 가능성이 높아집니다. 또한 저밀도 감염 시 민감도가 다소 떨어질 수 있습니다.

 

혈액도말법의 한계점도 있습니다. 말라리아 원충이 말초혈액 내에 항상 존재하는 것은 아니므로, 간헐적으로 음성으로 나올 수 있습니다[9]. 또한 헌혈이나 수직감염 등 비전형적 감염 시 진단이 어려울 수 있습니다. 따라서 다른 검사법과 병합하여 해석하는 것이 필요합니다.

혈액도말법의 활용과 최신 동향

말라리아 진단에서 혈액도말법은 어떻게 활용될까요? 현재 혈액도말법은 말라리아 확진 검사로서 가장 널리 사용되고 있습니다. 특히 유행 지역에서는 환자의 초기 평가에 매우 중요한 역할을 합니다. 치료 후 추적관찰 시에도 반복적인 혈액도말 검사를 통해 치료 반응과 재발 여부를 확인하게 됩니다[10].

 

그러나 최근에는 신속진단키트(RDT)의 사용이 증가하고 있는 추세입니다. RDT는 사용이 간편하고 숙련도를 요구하지 않아 일차 진료 현장에서 널리 쓰이고 있습니다. 하지만 RDT에 음성이더라도 의심 시에는 반드시 혈액도말 검사를 시행하는 것이 권장됩니다[11]. PCR과 같은 분자생물학적 기법도 개발되고 있으나, 아직 비용 등의 제약이 있어 제한적으로 사용되고 있습니다.

 

앞으로 혈액도말법은 어떤 발전이 기대될까요? 현미경과 카메라가 연동되어 자동으로 원충을 인식하고 계수해주는 시스템이 연구되고 있습니다[12]. 또한 형광 염색법, QBC(quantitative buffy coat) 등을 통해 검사의 민감도를 높이려는 시도도 계속되고 있습니다. 이러한 기술적 발전과 더불어 검사자 교육 프로그램의 강화, 질 관리 체계의 확립 등을 통해 혈액도말법의 정확성을 높여갈 수 있을 것입니다.

요약

말라리아의 혈액도말법은 말초혈액 도말 표본을 현미경으로 검경함으로써 말라리아 원충을 검출하는 진단 방법입니다. 비용이 저렴하고 특이도가 높아 말라리아 확진에 매우 중요한 역할을 하고 있죠. 그러나 검사자의 숙련도에 의존적이며 저밀도 감염에서는 민감도가 떨어지는 단점이 있습니다.

 

숙련된 혈액도말 검사를 위해서는 적절한 도말 표본을 제작하고, 염색 과정을 충실히 수행하며, 판독 시 원충의 감별점을 숙지하고 경험을 쌓는 것이 중요합니다. 이를 위해 반복 실습과 체계적인 교육이 필요할 것입니다.

 

혈액도말법은 유행 지역의 일차 진료 현장에서 가장 기본적이고 필수적인 검사법으로 활용되고 있습니다. 최근에는 신속진단키트의 도입이 확대되고 있으나, 혈액도말법의 중요성은 여전히 강조되고 있습니다.

 

향후 기술적 발전과 검사자 교육을 통해 혈액도말법의 정확성을 제고하고, 말라리아 진단과 관리에 더욱 기여할 수 있기를 기대합니다. 국내 의료진들도 말라리아 혈액도말법에 대한 이해와 숙련도를 높여, 해외 의료 활동이나 국제 협력에 적극 참여할 수 있기를 바랍니다.

참고 자료

[1] World Health Organization. (2010). Basic malaria microscopy: Part I. Learner's guide.

[2] CDC - DPDx - Diagnostic Procedures - Blood Specimens. (2019). Retrieved from https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/blood/microexam.html

[3] Bailey, J. W., Williams, J., Bain, B. J., Parker-Williams, J., & Chiodini, P. L. (2013). Guideline: the laboratory diagnosis of malaria. British journal of haematology, 163(5), 573-580.

[4] 질병관리청. (2020). 말라리아 진단 매뉴얼. Retrieved from http://www.kdca.go.kr/board/board.es?mid=a20507020000&bid=0019&act=view&list_no=365787

[5] Giemsa, G. (1904). Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nocht'schen Chromatinfärbung. CentralBlatt für Bakteriologie, 32, 307-313.

[6] Wongsrichanalai, C., Barcus, M. J., Muth, S., Sutamihardja, A., & Wernsdorfer, W. H. (2007). A review of malaria diagnostic tools: microscopy and rapid diagnostic test (RDT). The American journal of tropical medicine and hygiene, 77(6_Suppl), 119-127.

[7] Manser, M., Olufsen, C., Andrews, N., & Chiodini, P. L. (2013). Estimating the parasitaemia of Plasmodium falciparum: experience from a national EQA scheme. Malaria journal, 12(1), 1-7.

[8] Haditsch, M. (2004). Quality and reliability of current malaria diagnostic methods. Travel medicine and infectious disease, 2(3-4), 149-160.

[9] Jeremiah, S. S., Janagond, A. B., & Parija, S. C. (2014). Challenges in diagnosis of Plasmodium knowlesi infections.

 

 

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